諾博萊德 植物膜蛋白/葉綠體蛋白提取試劑盒

植物膜蛋白/葉綠體蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號：P5060

產(chǎn)品名稱：植物膜蛋白/葉綠體蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：植物膜蛋白/葉綠體蛋白提取試劑盒

規(guī)格：100T ; 50T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

NobleRyder P5060 植物膜蛋白/葉綠體蛋白提取試劑盒

葉綠體是植物細胞所te有的能量轉(zhuǎn)換細胞器，光合作用就是在葉綠體中進行的,由于具有這一重要功能，所以葉綠體一直是細胞生物學、遺傳學和分子生物學的重要研究對象。葉綠體蛋白/膜蛋白提取試劑盒用簡便快速的方法可以從各種植物樣本中提取葉綠體蛋白和植物膜蛋白，提取過程簡單方便，可在一小時內(nèi)提取得到高質(zhì)量的葉綠體蛋白和膜蛋白。本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細胞膜組份，包括細胞質(zhì)膜、葉綠體膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gelshift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

適用樣本：植物

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以 2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

2. 蛋白酶抑制劑在 2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或 37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請盡快使用完。

產(chǎn)品簡介：

葉綠體是植物細胞所te有的能量轉(zhuǎn)換細胞器，光合作用就是在葉綠體中進行的,由于具有這一重要功能，所以葉綠體一直是細胞生物學、遺傳學和分子生物學的重要研究對象。

葉綠體蛋白/膜蛋白提取試劑盒用簡便快速的方法可以從各種植物樣本中提取葉綠體蛋白和植物膜蛋白，提取過程簡單方便，可在一小時內(nèi)提取得到高質(zhì)量的葉綠體蛋白和膜蛋白。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細胞膜組份，包括細胞質(zhì)膜、葉綠體膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于 2D 電泳，如下游實驗需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請使用其他貨號的試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于 2D 電泳，用脫鹽柱脫鹽處理。

本試劑盒采用非酶法提取，提取過程簡單方便，速度快，可在 1 小時內(nèi)完成，而且絕少交叉污染，但是蛋白回收率相比酶法較低。酶法提取制備的蛋白，回收率稍有提高，蛋白純度高，保持天然活性，但是耗時較長。如果需要更加快捷的提取試劑盒，可以選擇非酶法的提取試劑盒，對提取速度沒有要求的話，可以選擇酶法提取試劑盒。

產(chǎn)品特點：

1. 使用方便。

2. 將蛋白提取的時間縮短至 1 小時。

3. 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

4. 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

5. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性。

自備試劑和儀器：

離心機、振蕩器、勻漿機/勻漿器/渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

使用方法：

一、使用注意事項：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

2. 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

二、操作步驟

1. 提取液準備：

每 500ul 冷的蛋白提取液 C 和 D 中分別加入 1ul 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

2) 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

2. 取新鮮植物樣本葉片，用純水或 PBS 洗凈擦干后去除葉梗和粗脈。

3. 用手shu剪刀盡可能剪碎。

每 500mg-1g 新鮮植物葉片樣本中加入 2ml 提取液 A，用勻漿機充分勻漿或用 Dounce 勻漿器充分勻漿。

【注】：

1) 勻漿盡可能充分。至無明顯可見固體。

2) 培養(yǎng)細胞直接收集細胞后用 Dounce 勻漿器勻漿即可，勻漿后加提取液 A 混勻后直接進行以下步驟離心。

3) 處理葉片等組織樣本如果沒有勻漿機，也可先加少量提取液 A 后用 Dounce 勻漿器充分勻漿后再加提取液 A 混勻。

4. 將勻漿用 100um 細胞篩過濾。

【注】：

1) 沒有細胞篩時可以不過濾，將勻漿液靜置 1 分鐘，待大的沒有破碎的組織塊自然沉降，

吸取上清。

2) 部分黏液較多的植物樣本可能難以吸取，可以將 1ml 吸頭的口剪掉一點再吸。

5. 將濾液 800g 力離心 3 分鐘。將上清（I）移入另一干凈離心管，留沉淀（I）待用。

6. 將上清（I）2000g 力離心 10 分鐘。收集沉淀（II）。將上清（II）吸出加入沉淀（I）

中重懸沉淀（I），留重懸液（A）進行步驟 11 待用。

7. 在步驟 7 沉淀（II）中加入 200ul 提取液 B，充分混勻后，在 2-8℃振蕩 20 分鐘。

【注】：

1) 用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保持液體有輕微晃動即可。

2) 沒有低溫振蕩條件可以不振蕩，在 2-8℃靜置，稍微延長處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

8. 將提取液在 4℃，12000×g 條件下離心 5 分鐘，取上清，棄沉淀。

9. 即得葉綠體蛋白。

10. 在重懸液（A）中加入 80ul 提取液 C，充分混勻，置 2-8℃振蕩 1-2 小時。

【注】：

1) 此步驟必須保持低溫條件下振蕩。

2) 用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保持液體有輕微晃動即可。

3) 沒有低溫振蕩條件可以不振蕩，在 2-8℃靜置，稍微延長處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

11. 在 37℃水浴 10 分鐘。

12. 在 37℃，1000×g 離心 2 分鐘。

【注】：

1) 此步驟必須 37℃條件下離心。

2) 如果離心機不可控溫，可以不離心，延長上一步驟水浴時間，至溶液分層清晰即可?；蛘咴谑覝貤l件下離心，縮短離心時間至 1 分鐘。

13. 此時溶液分為兩層，小心移除上層，保留下層溶液，下層體積大約 50ul 左右。

14. 在下層液體中加入 1-2 倍體積的溶解液 D，充分溶解，即得植物膜蛋白樣品。

【注】：

1) 膜蛋白比較難溶解，不能很快溶解混勻，可以在加入溶解液后稍微吹打混勻，然后置于 4℃冰箱靜置至溶解。中途用移液器輕輕吹打混勻一次。靜置后取出再次用移液器稍微吹打混勻即可。

2) 于 4℃靜置直至管底透明膠狀物wan全溶解。

15. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛘{(diào)整相應(yīng)的濃度后直接用于下游實驗。

【注】：

1) 建議用 BCA 法進行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得優(yōu)良實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

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