諾博萊德 植物核蛋白/胞質(zhì)蛋白提取試劑盒（非酶法）

植物核蛋白/胞質(zhì)蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號：P5044

產(chǎn)品名稱：植物核蛋白/胞質(zhì)蛋白提取試劑盒（非酶法）

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

中文名稱：植物核蛋白/胞質(zhì)蛋白提取試劑盒（非酶法）

規(guī)格：100T ; 50T

儲存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

NobleRyder P5044 植物核蛋白/胞質(zhì)蛋白提取試劑盒（非酶法）

植物核蛋白和細胞質(zhì)蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種植物細胞和各種實體植物組織，如葉片、根、種子等植物組織中提取核蛋白和其它細胞質(zhì)蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內(nèi)完成。制備的核蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解植物核組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gelshift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

適用樣本：植物

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請盡快使用完！

產(chǎn)品簡介：

植物核蛋白和細胞質(zhì)蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種植物細胞和各種實體植物組織，如葉片、根、種子等植物組織中提取核蛋白和其它細胞質(zhì)蛋白。提取過程簡單方便，可在 1 小時內(nèi)完成。制備的核蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解植物核組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于 2D 電泳，如下游實驗需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請使用其他貨號的試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于 2D 電泳，用脫鹽柱脫鹽處理。

本試劑盒采用非酶法提取，提取過程簡單方便，速度快，可在 1 小時內(nèi)完成，而且絕少交叉污染，但是蛋白回收率相比酶法較低。酶法提取制備的蛋白，回收率稍有提高，蛋白純度高，保持天然活性，但是耗時較長。如果需要更加快捷的提取試劑盒，可以選擇非酶法的提取試劑盒，對提取速度沒有要求的話，可以選擇酶法提取試劑盒。請根據(jù)實際需要選擇試劑盒。

產(chǎn)品特點：

1.    使用方便。

2. 將蛋白提取的時間縮短至 1 小時。

3. 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

4. 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

5. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6種獨立的蛋白酶抑制劑 AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

自備試劑和儀器：

離心機、振蕩器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心

管、吸頭、一次性手套、100 μm 細胞篩。

使用方法：

一、使用注意事項：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

2. 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

3. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

4. 可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

5. 離心機轉(zhuǎn)速有相對離心力（RCF，×g）和每分鐘轉(zhuǎn)速（RPM）兩種表示方式，有些離心機設置有RPM和×g顯示切換，但部分離心機沒有自動切換功能。需要用下面的公式進行換算： g=r×1.118×10-^5×rpm² （r為有效離心半徑，即從離心機軸心到離心收集管底部中心位置的長度，單位為厘米)例如 : 轉(zhuǎn)速 為 3000rpm， 有效 離心 半徑為 10cm，則 相對 離心力 （ RCF， ×g ）為=10×1.118×10^-5×3000²=1006.2（×g）。

二、操作步驟：

1. 提取液準備：

每 500μl 冷的蛋白提取液 A 中加入 1μl 蛋白酶抑制劑；每 200μl 蛋白提取液 B 中分別加入 1μl 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

2) 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

2. 取200-500 mg新鮮植物葉片樣本，用PBS或純水洗凈擦干后去除葉梗和粗脈，用手術jian刀盡可能剪碎。

3. 加入500-1000μl提取液A后用勻漿機充分勻漿或勻漿器充分勻漿。

【注】：

1)    勻漿盡可能充分。至無明顯可見固體。

2) 培養(yǎng)細胞直接收集細胞后用勻漿器勻漿即可，勻漿后加提取液A 混勻后直接進行以下步驟離心。

3) 處理葉片等組織樣本如果沒有勻漿機，也可先加少量提取液A 后用勻漿器充分勻漿后再加提取液A混勻。

4. 將勻漿用100um細胞篩過濾。

【注】：

1) 沒有細胞篩時可以不過濾，將勻漿液靜置 1 分鐘，待大的沒有破碎的組織塊自然沉降，吸取上清。

2) 部分黏液較多的植物樣本可能難以吸取，可以將1ml 吸頭的口剪掉一點再吸。

5. 將濾液在4℃，800×g條件下離心5分鐘。

6. 收集沉淀（I），將上清（I）移入另一干凈的離心管。

7. 在沉淀（I）中加入100-200μl冷的提取液B，高速渦旋5秒，充分混勻。

8. 置4℃振蕩20-40分鐘。

【注】：

1) 用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保持液體稍微有晃動即可。

2) 沒有低溫振蕩條件可以不振蕩，在2-8℃靜置，稍微延長處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

9. 在4℃，12000×g 條件下離心10分鐘。

10. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即得到核蛋白。

11. 在步驟6中的上清（I）中加入50μl胞質(zhì)提取液C，高速渦旋振蕩10秒，充分混勻。

12. 置4℃振蕩5分鐘。

13. 在4℃，12000×g條件下離心5分鐘。

14. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即得到細胞質(zhì)蛋白。

15. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?/span>

【注】：

1) 建議用BCA法進行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得優(yōu)良實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規(guī)定程序處理。

植物核蛋白/胞質(zhì)蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品訂購信息：

P5044  植物核蛋白/胞質(zhì)蛋白提取試劑盒（非酶法）  50T/100T