諾博萊德 植物核蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）-酶法

植物核蛋白提取試劑盒-酶法 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：P5078

產(chǎn)品名稱：植物核蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）-酶法

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：植物核蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）-酶法

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5078 植物核蛋白提取試劑盒（蛋白組實(shí)驗(yàn)、質(zhì)譜適用）-酶法

植物核蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種植物細(xì)胞和各種實(shí)體植物組織，如葉片、根、種子等植物組織中提取核蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，可在1小時(shí)內(nèi)完成。制備的核蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解植物核組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒的蛋白提取組份中不含有不可透析除去的去垢劑組份，不含SDS、TritonX-100、chaps等可能影響質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)的組份，最后得到的蛋白質(zhì)樣品經(jīng)過(guò)透析或者脫鹽處理后將不含有去垢劑、高濃度鹽等影響，基本可以滿足下游任意的蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。本產(chǎn)品的蛋白酶抑制劑混合物中不含AEBSF，可以避免由于AEBSF導(dǎo)致的質(zhì)譜峰漂移，因此使用本產(chǎn)品提取的蛋白樣品可以用于質(zhì)譜（MassSpectrometry,MS）檢測(cè)和分析，蛋白質(zhì)組學(xué)（proteomics）等相關(guān)研究。本試劑盒提取的蛋白也可用于WesternBlotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

適用樣本：植物

注：

1. 提取液A 長(zhǎng)期不用請(qǐng)置-20℃保存。

2. 蛋白酶抑制劑未開(kāi)蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開(kāi)蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

3. 蛋白酶抑制劑在 2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或 37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。

4. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

植物核蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種植物細(xì)胞和各種實(shí)體植物組織，如葉片、根、種子等植物組織中提取核蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，可在 1 小時(shí)內(nèi)完成。制備的核蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解植物核組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合

物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒的蛋白提取組份中不含有不可透析除去的去垢劑組份，不含 SDS、Triton X-100、chaps 等可能影響質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)的組份，最后得到的蛋白質(zhì)樣品經(jīng)過(guò)透析或者脫鹽處理后將不含有去垢劑、高濃度鹽等成分，基本可以滿足下游任意的蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。

本產(chǎn)品的蛋白酶抑制劑混合物中不含 AEBSF，可以避免由于 AEBSF 導(dǎo)致的質(zhì)譜峰漂移，因此使用本產(chǎn)品提取的蛋白樣品可以用于質(zhì)譜(Mass Spectrometry, MS)檢測(cè)和分析，蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)等相關(guān)研究。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白也可用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D 電泳，如下游實(shí)驗(yàn)需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請(qǐng)使用其他貨號(hào)試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于2D 電泳，用脫鹽柱脫鹽處理。

本試劑盒采用酶法提取，酶法提取制備的植物核蛋白，回收率提高，純度高，但是耗時(shí)較長(zhǎng)。非酶法的提取試劑盒提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，速度快，可在1 小時(shí)內(nèi)完成，而且絕少交叉污染，提取得到的蛋白活性優(yōu)于酶法提取，但是回收率相比酶法較低。如果需要更加快捷的提取試劑盒，可以選擇非酶法的提取試劑盒，對(duì)提取速度沒(méi)有要求的話，可以選擇酶法提取試劑盒。請(qǐng)根據(jù)實(shí)際需要選擇試劑盒。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，1×PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套、100 μm 細(xì)胞篩。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 使用方便。

2. 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

3. 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

4. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑 AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

2. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

3. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

4. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

二、植物組織核蛋白提?。?/span>

1. 提取液制備：

將試劑 B1 和試劑 B2 混合，配成蛋白提取液 B，充分混勻備用。

每 500μl 提取液 B 中加入 2μl 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

2) 加過(guò)蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

2. 取 500 mg-1 g 新鮮植物葉片樣本，用純水洗凈擦干后去除葉梗和粗脈，用手shu剪刀或鋒利的刀片剪切碎，切成 0.5 mm*0.5 mm 細(xì)塊。

3. 加入 500μl 提取液 C，充分混勻。

4. 將懸液置振蕩器上室溫振蕩 12-72 小時(shí)。

【注】：

1) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保證提取液能輕微晃動(dòng)即可。

2) 沒(méi)有振蕩條件也可以不振蕩，中間每隔幾小時(shí)用移液器輕輕吹打混勻即可。

3) 不同類型的植物樣本需要處理的時(shí)間差異較大。擬南芥較易處理，鮮嫩葉片較易處理，年齡小的樣本處理時(shí)間短。

4) 部分細(xì)胞壁較厚的植物類型可能需要處理更長(zhǎng)時(shí)間?？梢匝娱L(zhǎng)至 72 小時(shí)以上處理以提高得率。

5. 在 1000×g 條件下離心 5-10 分鐘，棄上清，收集沉淀。

【注】：

1) 有條件可以用 100 um 細(xì)胞篩網(wǎng)過(guò)濾提取液處理液后，收集濾液再離心。

2) 沒(méi)有細(xì)胞篩可以不過(guò)濾。

6. 在沉淀中加入 1 ml 提取液 A 后用勻漿機(jī)充分勻漿或者用勻漿器充分勻漿。

7. 將勻漿用 100μm 細(xì)胞篩過(guò)濾。

【注】：

1) 液體量少時(shí)可以加入 1-2 ml PBS 混勻后再用細(xì)胞篩過(guò)濾。

2) 沒(méi)有細(xì)胞篩時(shí)可以不過(guò)濾，將勻漿液靜置 1 分鐘，待大的沒(méi)有破碎的組織塊自然沉降，吸取上清。

3) 部分黏液較多的植物樣本可能難以吸取，可以將 1 ml 吸頭的口剪掉一點(diǎn)再吸。

8. 將濾液在 100×g 條件下離心 3 分鐘，棄沉淀，收集上清。

【注】：

1) 部分黏液較多的植物樣本可能很粘稠難以離心，可以加入 1-2 ml PBS 稀釋，充分混勻

后再離心。

9. 在 2000×g 條件下離心 10 分鐘，棄上清，收集沉淀。

10. 在沉淀中加入 150-250μl 提取液 B，充分混勻。

11. 置振蕩器 2-8℃振蕩 30-45 分鐘。

【注】：

1) 用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保持液體有輕微晃動(dòng)即可。

2) 沒(méi)有低溫振蕩條件可以不振蕩，在 2-8℃靜置，稍微延長(zhǎng)處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

12. 在 4℃，12000×g 條件下離心 15 分鐘。

13. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即得到核蛋白。

14. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 建議用 BCA 法進(jìn)行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒(méi)有問(wèn)題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

15. 將蛋白樣品透析處理或者脫鹽柱脫鹽處理后用于下游實(shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 蛋白樣品中含有鹽，需要脫鹽處理后用于雙向電泳。

2) 經(jīng)透析或脫鹽離心柱處理的蛋白樣品不含有去垢劑和高濃度鹽。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

植物核蛋白提取試劑盒-酶法 常備現(xiàn)貨

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